团队后续开展了多角度的证明工作，如通过干扰、敲除、过度表达等技术，反复证明lnc-Lsm3b能够在病毒感染的细胞中，通过“分子诱饵”的方式锁定RIG-I，使其不与病毒RNA结合。

海量实验 顶级期刊的尖锐难题被逐个攻克

全新的发现，使得团队兴奋异常。没想到的是，更大的磨砺还在后面。

团队向顶级期刊投稿，审稿人却要求必须用CLIP（交叉互连免疫沉淀）技术明确RNA的哪一个点和蛋白质相互作用，连接在一起。用语言很难解释蛋白质和RNA在活体细胞内错综复杂的关联，姜明红给科技日报记者画图：一个长链RNA会结合多个蛋白，这些蛋白有的是特异连接，连得紧密，有的就是“挂”在上面，而蛋白之外还会带上其他的RNA，“缠绕”“连带”“虚实”……

CLIP很难做，国内实验室极少有成熟的经验。收到修改意见后的团队成员开始大量查阅论文。“国外的实验流程无法完全照搬，不同的细胞做法不同，需要重新摸条件。”团队中主要攻关这一技术的刘伦说。

CLIP技术和RIP（RNA结合蛋白免疫沉淀）技术类似，但是却能够达到单个碱基的分辨率。为此，通过海量实验，针对裂解液的成分如何影响细胞内物质，团队开始了如指掌；不同RNA酶的脾气也熟练掌握。

“实验室的部分我们自己攻克了，但是测序公司表示无法进行匹配的测序工作，原因是无法合成特有的适当引物。”刘伦说，国内没有公司生产CLIP所需引物，而RNA测序必须先反转录为cDNA才能够进行，引物决定了反转录的准确性，决定了目标位点能否确定。实验室自己担负起RNA转录、构建cDNA文库的工作。完成3代测序、用化学方法测量分子间的相互作用力……这些免疫研究实验室原本并不擅长的难题被团队逐个攻克。

按图索骥 摸索并掌握一套独有技术体系

根据已有发现，团队按图索骥，利用分子筛层析实验证实缺失lnc-Lsm3b表达的巨噬细胞在感染病毒以后，多聚化的RIG-I蛋白显著增加。他们推测，病毒RNA与RIG-I结合以后，能够诱导RIG-I单体形成多聚化状态，从而激活下游信号通路。而lnc-Lsm3b只与单体结合，可能是通过抑制RIG-I的多聚形成抑制RIG-I的活性。

“Lsm3b只能结合单体的RIG-I蛋白、一条链能结合9个蛋白、结合力比病毒RNA高……”这些都是对这个全新RNA分子的多角度了解。

如同向“黑洞”中打进一束光，曹雪涛团队在对现有知识体系颠覆的同时，肯定地回答了学界之前关于这类自身RNA分子是否存在、功能几何的争议。

“过去我们用别人的技术进行实验，现在我们自己摸索并掌握一套独有的技术。”曹雪涛说，整个研究的“练兵”不仅拓展了人类的“知识域”，还拓展了实验室的思路和眼界。接到《细胞》杂志编辑部发来修改要求时感受到的“不可思议”和巨大压力，团队成员现在已能笑谈。

“只是这段RNA与人类的同源性很低。”姜明红表示了小小的惋惜，这意味着，该发现无法直接应用于人类的新药创制领域，但是，其他拥有人源细胞材料的机构，可以沿着这条路，进一步发现人类机体内是否存在相似的RNA。曹雪涛更看重的是，确定靶点的方法一旦被高质量地掌握，就能够确定蛋白质的靶点，进而确定药物作用的靶点，助力抗病毒药物的研发。

（原标题：长期被误解 非编码RNA存在“认知黑洞”）

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